質粒小量提取試劑盒常見問題與解析
點擊次數:1095 更新時間:2020-10-30
質粒小量提取試劑盒常見從1~4mL菌液可以抽提到5~30?g的質粒,純度高,OD260/OD280比值一般為1.8-2.0之間,質粒可直接用于PCR、酶切、轉化測序和體外轉錄等后續實驗。那么在實驗過程中常見問題有哪些,下面跟小編一起來看一下。
質粒得率低可能原因及解決辦法:
1、菌體未活化,生長效率低,菌量少。需要活化菌種。
2、屬于低拷貝質粒,增加菌液的量。
3、SolutionB裂解不充分,室溫靜置5min。
4、后洗脫體積不夠,洗脫液不少于50?L。
質粒純度差可能原因:
1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。
2、加入SolutionB劇烈震蕩,使得基因組斷裂。
3、加入BufferN操作慢,形成微小沉淀,蛋白質無法被充分漂洗干凈。
4、BufferW2未加入無水乙醇。
5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之間,小于1.8可能有蛋白污染,大于2.0有部分降解或RNA污染。