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更換培養基培養細胞應注意的問題
點擊次數:766 更新時間:2022-02-16
  能否使用細胞說明書上不同的培養基來培養細胞?產品目錄或者細胞說明書上的推薦的培養基一般是細胞株的原始提供者推薦的培養基或者已經經過驗證的對該細胞株最合適的培養基,細胞對未推薦的培養基也許會適應,也有可能不適應。對于更換培養基,應謹慎對待,更換培養基時,應留一瓶細胞使用推薦的培養基培養,留作種子。
 
  更換培養基有兩種方法,最jian單的方法是直接更換培養基,強制使細胞適應新的培養基;還有一種更溫和的方法:傳代細胞的時候分成細胞兩瓶,第一瓶使用原來推薦的培養基,第二瓶使用50%原來推薦的培養基,50%新的培養基,之后仔細觀察細胞的生長狀態,如果第二瓶細胞生長狀態不好,應立即停止更換培養基,如果第二瓶生長狀態好,可以繼續傳代分瓶,一瓶使用50%原來推薦的培養基,50%新的培養基,另一瓶使用25%原來推薦的培養基,75%新的培養基,繼續觀察,如果細胞狀態好,可以全部換成新鮮的培養基。
 
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培養基實驗需要遵循的三大原則
 
  一、 配制培原則
 
  目的要明確,根據不同的微生物的營養要求配制針對強的培養基。自養型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質、核酸、維生素等復雜的有機物,因此培養自養型微生物的培養基*可以由簡單的無機物組成。
 
  二、操作要規范
 
  細菌培養,要掌握溫度、濕度、時間、環境等因素,微生物限度檢驗細菌培養溫度為30~35℃,此溫度適于中溫菌生長,某些高溫菌在該溫度下也可以生長。藥品污染的控制菌多是中溫菌。根據不同菌株及檢驗目的選擇不同的培養時間。根據細菌對環境要求不同常用培養方法如下
 
  1.需氧培養法:此為最chang用的培養方法,適于需氧菌和兼性厭氧菌的培養。
 
  2.厭氧培養法:厭氧菌的培養,必須在無氧的環境中進。
 
  3.需氧培養法:有些細菌為微需氧菌在微需氧環境(5%02、10%CO2、85%N2)生長良好,微需氧培養法常用的有混合氣體法、氣袋法、雙平板法、燭缸法這幾種。
 
  三、講究經濟節約
 
  在配制培養基時應盡量利用價廉且易于獲得的原料為培養基成分,特別在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。如在微生物單細胞蛋白的工業生產中,常常用利用糖蜜、豆制品工業廢液等作為培養基的原料,另外大量的農副產呂如麩皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅等都是常用的發酵工業原料。
 
  培養基在使用過程中應注意的問題
 
  (1)培養基在使用前需37 oC預熱或在室溫平衡后再使用。
 
  (2)細胞培養過程中,吸取過培養液的吸管不能再用火焰燒灼,防止殘留在吸管內的培養基焦化,將有害物質帶入培養液中。
 
  (3)盡量縮短各種液體、細胞的暴露時間。
 
  (4)避免液體間、細胞間的交叉污染。
 
  (5)配制*培養基時,配制的量最好在2周內用完為好。
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