微生物樣品的掃描電鏡觀察廣泛地應用于微生物學研究的各領域。為微生物資源的利用,微生物生物技術、遺傳工程、環境保護等提供了大量直觀的,有科研價值的形態學依據。 大多數微生物樣品體積微小,使樣品制備,尤其是臨界點干燥,離子濺射等難于操作。積多年微生物制樣的經驗,遠慕為大家介紹微生物中有代表性的細菌,霉菌的制樣技術,其他微生物樣品均可參照處理。

1、細菌

取液體或固體培養基中培養20h左右、旺盛生長的菌體。

(1)收集菌體:?液體培養基中的菌體,可取培養液8000rpm離心3~5min,棄上清,倒入215%戊二醛固定液;?固體培養基上的菌體,可在菌落表面滴幾滴戊二醛固定液,輕刮菌落(注意不要刮下培養基)。將菌液吸入小離心管,離心后換入新鮮戊二醛固定。

(2)固定,脫水按常規方法。215%戊二醛,2~4hy磷酸緩沖液清洗3次y1%鋨酸4~6hy緩沖液清洗3次y乙醇梯度脫水,30%,50%,70%,85%,95%各一次,100%乙醇2次,15~20minP次y乙酸異戊酯置換2次,20minP次(注意:每步均需離心,8000rpm,3~5min,棄上清,倒入下一種試劑,滴管來回吸幾下,打散菌塊)。

(3)臨界點干燥:普通定性濾紙裁成35mm@18mm的紙條,將長邊 35mm平均分成3份,對折成小紙包,用訂書釘將一端訂牢,成小口袋狀。將離心濃縮后的菌液滴入小紙包,立即用釘書器將另一端釘牢。放入臨界點干燥器樣品室,進行CO2臨界點干燥。一般每次可同時處理10~20種不同菌樣(注意,需用液態CO2置換2~3次)。

(4)離子濺射金:沿兩端書釘剪開濾紙包,將干燥后粉末狀純菌體倒入平皿,輕搖盡量分散菌體。碳導電膠帶一面粘在1P4蓋玻片上,另一面倒扣輕壓在菌體粉末上,翻正后用鑷子或牙簽將菌體輕輕刮薄鋪平。離子濺射金后,即可進行掃描電鏡觀察。

2、霉菌

取在固體培養基上旺盛生長的曲霉菌落。

(1)取材:在菌落四周用刀片劃5mm@5mm見方小塊。用刀片將小塊挑出,片成2mm厚的薄片。材料投入裝有戊二醛固定液的青/霉素小瓶(因菌塊易漂浮,用注射器從橡膠瓶塞刺入,抽出空氣,使樣塊沉下)。

(2)固定,脫水,臨界點干燥,離子濺射金參照組織塊制樣常規方法。